南京鼠尾胶原

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用：胶原蛋白具有抗氧化作用，但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建，对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的：探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法：将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿（实验组）和普通培养皿（对照组）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2诱导。24h后，以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态，应用MTT比色法检测心肌细胞存活率，TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态，流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平，Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶作为基质包被培养器皿。南京鼠尾胶原

鼠尾胶原实验应用：鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式，为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法.方法制备鼠尾胶原并铺片，以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞，培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构，应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率.结果鼠尾胶原要平坦均匀，平均厚度约为1mm；HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开；扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形，纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接；同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的；同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的.结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立，为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。正规鼠尾胶原哪家便宜建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。

胶原蛋白占人体蛋白质总量的三分之一，不论来源于哪一种动物或哪一种组织的胶原都有许多共同特性。胶原蛋白可分为20几个亚型，但为常见的为I、II、III型胶原蛋白，即间质胶原蛋白。其中I型为丰富且品质优良。划重点：任何动物的胶原都有许多共性，I型胶原蛋白为丰富且品质优良，鼠尾胶原蛋白是I型胶原蛋白。于是，动物中心就进行了有关“耗子尾汁”的发明：一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法并在说明书中给出了原因：“一般的生物体中提取的胶原蛋白多为混合型，之前多从牛皮、猪皮、牛腱中提取，但这类胶原蛋白不仅有油脂等其他杂质，

三维胶原的制备：鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷):10xPBS(可含10mg/L的酚红用于pH指示)或10x培养液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。鼠尾胶原，是一种细胞支持物，它是细胞外基质的主要成份。

一种生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法：1.用0.03〜0.06mol/L的柠檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液；在冰水浴中，调节pH=6.5，用的3〜6mol/L的NaCl溶液缓慢加入上清液中，不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出，4°C沉淀10小时，去除上清液，去除上清液，絮状溶液高速冷冻离心处理，收集沉淀；2.用0.03〜0.06mol/L的柠檬酸再次溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液，冰水浴中，调节PH=6.5;溶液依次通过阳离子交换树脂、阴离子交换树脂进行脱盐处理；(8)将脱盐后的胶原蛋白溶液，-40至-20°C预冻2〜4小时，然后真空冷冻干燥，冻干产品经进一步处理得到含水率在3%以下的胶原蛋白微粉，灭菌、包装，得到成品胶原蛋白粉末。不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出。杭州正规鼠尾胶原推荐厂家

将无组织纤维、脂肪和多糖残留的鼠尾腱，真空冷冻干燥备用。南京鼠尾胶原

实验应用：鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性，免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法，并且制作简便,成本低廉。南京鼠尾胶原