血浆外泌体的提取

外泌体是新型治理剂，瘤转移是一个包括病细胞侵入、血管中存活和殖民化等多步骤的复杂过程。外泌体能够影响这个级联反应的每一步，因此可作为瘤治理的靶点。瘤细胞在转移到其他组织时需要在间质细胞间移动并到达血管中，在这个过程中，瘤细胞外泌体通过纤维连接蛋白促进瘤细胞的运动性，再通过蛋白酶促进细胞外基质的分解、血管生成，进而促进瘤转移。多数瘤细胞对转移的组织具有指向性，而外泌体表面的整合素就是决定其指向性的因子，如外泌体αvβ5整合素决定了对肝脏的指向性，而外泌体α6β4?α6β1整合素决定了对肺部的指向性。外泌体无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。血浆外泌体的提取

外泌体的生物发生和鉴定。液体和细胞外成分，如蛋白质、脂类、代谢物、小分子和离子，可以通过内吞作用和质膜内陷，与细胞表面蛋白一起进入细胞。由此产生的胞腔侧质膜芽的形成表现为质膜的外-内取向。这一出芽过程导致芽的形成可能与内质网(ER)、跨高尔基网络(TGN)和线粒体预先形成的早期核内体融合。ESEs也可以与ER和TGN融合，这可能解释了内吞物如何到达它们的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。外泌体细胞外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。

干细胞外泌体可直接促进血管生成,改善大脑缺氧后的损伤。因此，干细胞外泌体可用于中风的治理，改善神经预后，增加血管与神经生成。干细胞外泌体对多种类型的免疫细胞均具有免疫调节作用，包括树突状细胞、T细胞、B细胞和巨噬细胞。静脉输注干细胞外泌体可抑制CD4+T和CD8+T细胞的活化和浸润，从而延长GVHD小鼠模型的存活时间，并减少多个组织的病理损伤。干细胞在人类健康领域所发挥出来的潜能，令人惊叹。而干细胞外泌体，作为干细胞与其它组织细胞相互交流信息的载体，俨然会成为生物医学研究的新风口之一。

外泌体的相关成分：1、外泌体的膜同细胞一样，是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白，能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流动，参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的：如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列（GGAG/CCCU），进行主动包埋。外泌体具有检测包括病症在内的许多病理状况的潜力，可用于对心血管疾病和病症等多种疾病的诊断和监测。

为了解决外泌体实验遇到的上述的各种问题,Wako研发出MagCapture™外泌体提取试剂盒PS（MagCapture™ExosomeIsolationKitPS）提取高纯度细胞外囊泡。外泌体膜含有分泌细胞源的蛋白和脂质，众所周知磷脂酰丝氨酸（PS）在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧，暴露在外泌体膜外侧3）。另外，T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4（Tim4通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体）蛋白通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合4）。基于上述知识，我们利用Tim4固化磁珠，在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体，再添加螯合剂洗脱外泌体，这种外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发，并取得了成功。5）这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化方法。外泌体的形成始于细胞内陷，成熟于多囊泡胞内体，终于膜融合。血浆外泌体的提取

外泌体具有异质性，即使是同一种细胞分泌的外泌体都有可能具有比较大功能区别。血浆外泌体的提取

瘤释放的外泌体可以通过削弱免疫效应细胞的反应和激发免疫抑制细胞的扩增，来营造一个免疫抑制的环境。瘤释放的外泌体可以替代瘤细胞接受免疫系统的攻击，从而帮助瘤细胞逃过免疫系统的识别。瘤释放的外泌体可以引发炎症，利用基质浸润细胞的反应营造出利于瘤生长的微环境。研究表明，在过去短短的5年里，对外泌体的研究已经取得了比较好的的进展。如今，收集并分析瘤释放的外泌体已经成为液体活检的一个重要研发方向。靶向瘤释放外泌体的治理策略将对改善病症患者的命运发挥出举足轻重的影响。血浆外泌体的提取

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