RNA病毒高通量测序技术

目前对我国首例输入性裂谷热病例病毒进行全基因组测定,分析其进化来源及潜在变异.方法提取样本核酸,非特异性反转录扩增病毒基因组RNA,使用IonTorrent二代测序仪进行病毒全基因组测定.对获得的基因组数据进行序列拼接、比对、进化树构建和关键位点分析.结果通过测定获得了病毒全基因组11979nt,该测定病毒属E基因分支,序列与先前南非分离株Kakamas相似度较高(＞98％)。病毒Gn蛋白C端信号肽区存在1个氨基酸突变.结论本研究分析测定的裂谷热病毒全基因组与目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出现明显变异。

全基因组测序注意事项：要找正规的机构。RNA病毒高通量测序技术

高通量测序技术又称“下一代“测序技术或深度测序技术，可以一次性对几十万至几百万条DNA分子进行序列测定。现已普遍应用在基因组测序、基因表达分析、非编码小分子RNA鉴定、转录因子靶基因筛选及DNA甲基化等相关的研究领域。高通量测序技术是对传统测序一次性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(nextgenerationsequencing)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deepsequencing)。

国内病毒全基因组测序诊断高通量测序技术正式启用之后，研究者可以将样品处理至标准浓度和体积后进行测序和分析。

全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。全基因组预测的意义揭示了人类生、老、病和死的奥秘，使人类从根本上认知疾病发生的原因，做到正确的调整疾病和尽早的预防疾病。每个人从开始就继承了父母的DNA遗传信息，并且携带一生，不易改变。全基因组测序通过运用新一代高通量DNA测序仪，进行10到20倍覆盖率的个人全基因组测序，然后与人类基因组精确图谱比较，得到完整的个人全基因组序列，破译个人全部的遗传信息的过程。全基因组测序覆盖面广，能检测个体基因组中的全部遗传信息，准确性高。

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对病毒的全基因组进行测序：对病毒的全基因组进行测序主要是通过非特异性扩增+克隆结合sanger测序来完成的。当物种有了参考的序列之后，可以通过特异性扩增+sanger测序获得全基因组序列。Sanger测序准确度高，读长很长，但与此同时，扩增和克隆工作费时费力，由于流程繁琐，加上快速变异导致引物无法通用，该方法对于大量基因组的测序工作而言，可操作性不强，这对于研究者一直是一个困扰。高通量测序技术正式启用之后，研究者可以将样品处理至标准浓度和体积后进行测序和分析，减少了工作量，增加了成功率。探普生物进行了大量有针对性的研发和测试，开发了全套的实验和分析流程用于对病毒的全基因组进行测序，该流程自运行以来广受研究者们好评。

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病毒基因组测序是疾病诊断、流行病学调查和宿主-病原关系研究的重要手段。RNA病毒高通量测序技术

高通量测序在病毒准种研究中如何应用 在采用高通量测序技术研究准种耐药性方面，人类免疫缺陷病毒(HIV)较为突出。人类免疫缺陷病毒的逆转录酶有非常大的错配倾向，造成几乎每复制1轮出现1个碱基对替换突变。被侵染的个体中存在非常巨大的病毒群，每天有1010个病毒粒子产生和死亡，在侵染后这种行为导致病毒快速形成一个多样性的群，即准种。高通量测序是研究大群体中序列突变体特征的先进方法，它的一种应用是对个体抗病毒治疗失败时产生的数量很少的耐药突变的定量研究。RNA病毒高通量测序技术

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