南京裸鼠疾病动物模型建模

在cns，pirb的功能和下游抑制性信号通路仍然未被阐明，因此迫切需要pirb的细胞和动物模型。目前对于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制剂，或者采用慢病毒转染。前者受到是否能够透过血脑屏障和抑制剂效率的影响，后者慢病毒转染在原代细胞和在体的转染效率比较低，使研究pirb的功能受到极大的限制。为解决这些问题，我们通过crispr/cas9技术建立了pirb基因敲入小鼠，将pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位点，为研究pirb在免疫系统或者神经系统的作用和机制提供了很好的工具。技术实现要素：本发明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠动物模型。动物模型作为人类疾病的缩影。南京裸鼠疾病动物模型建模

呼吸系统疾病动物模型（animalmodelofrespiratorydiseases）1、肺炎动物模型：通过在主支气管注入活菌液。2、肺气肿模型：给动物气管内或静脉内注入一定量木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、致热溶解酶、败血酶以及由脓性痰和白细胞分离出来的蛋白酶等，可复制成实验性肺气肿。以木瓜蛋白酶形成的实验性肺气肿病变明显而且典型。3、肺水肿模型：用氧化氮吸入可造成大鼠和小鼠中毒性肺水肿，或用气管内注入50％葡萄糖液引起渗透性肺水肿。4、肺纤维化模型：气管内注入博来霉素是目前常用复制肺纤维化动物模型方法。南京裸鼠疾病动物模型建模早期阶段科学假说与疾病潜在药物治疗效果评价始于小鼠疾病模型构建及其实验室研究。

步骤3、pmsg处理c57bl/6雌性小鼠(6周龄，平均体重20g)，46h后注射hcg，与雄性小鼠合笼交配，次日取受精卵进行显微注射，将步骤1的grna1、grna2、cas9蛋白以及线性化后的打靶载体一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内，产出小鼠，即f0代小鼠。上述步骤中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl，cas9蛋白购自newenglandbiolabs，货号为m0386m。步骤4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr扩增产物测序，鉴定是否为嵌合体。本发明用于f0代小鼠pirb基因pcr鉴定的特异性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1对应的扩增产物大小为，primers2对应的扩增产物为。用于f0代小鼠测序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。

目前鉴定出15个外显子，外显子1起始密码为atg，外显子15的终止密码子是tga(转录本：)。pirb蛋白属于i型跨膜糖蛋白，包含由六个免疫球蛋白样结构域(domain，d)组成(d1-d6)的胞外段，一个疏水的跨膜段，三个免疫受体酪氨酸依赖的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一个itims样序列组成的胞内段。理论上讲，pirb的分子量约为92kd，但是western-blot分析中，pirb经常位于105kd处，因为pirb是糖蛋白。以往研究发现，pirb在免疫系统和中枢调节中均发挥重要作用。在免疫系统中，pirb在许多造血细胞都有表达，包括b细胞、肥大细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突细胞，但是在胸腺细胞、成熟的t细胞和自然杀伤细胞不表达。动物疾病模型广泛应用于新药靶点发现及筛选。

f1代小鼠southern印记的5’探针引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印记的目标片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步骤c、采用限制性内切酶bamhi和avrii对dna进行切割；琼脂糖凝胶电泳分离dna；步骤d、将dna转到尼龙膜上；步骤e、探针变性后，与dna分子进行杂交，nbt/bcip化学显色法显色，拍照观察。southern杂交结果如图6所示，可以看到：6、8、9号pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步骤6、将f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子pirb基因敲入小鼠，即为本发明所述小鼠pirb基因敲入的动物模型。将本发明获得的动物模型f2代纯合子小鼠与同品系小鼠组织/细胞特异性cre表达的小鼠杂交，获得f3代小鼠，可以实现在不同组织或者细胞类型中敲入pirb基因。对f3代小鼠进行基因型的鉴定：含有无(pirb-cwt)、一个(pirb-chet)或者两个。构建人源移植瘤模型需要合适的免疫缺陷小鼠想知道如何选择？盐城疾病动物模型建模厂家

如何定义好的小鼠疾病模型？南京裸鼠疾病动物模型建模

腰椎间盘突出是造成全球大部分地区工作缺失和活动受限的主要疾病，随着日常生活节奏的不断加快,腰椎间盘突出症已经成为临床脊柱外科的常见病和多发病,而且发病人群越来越呈现年轻化及普遍化的趋势。该病主要是由于腰椎长期的受力不均或突然性外伤,导致腰椎纤维环出现变形、破裂，纤维环、髓核及软骨终板单独或同时外突,从而压迫到坐骨神经、神经根或马尾神经，患者出现腰部疼痛，牵连股部，下肢足部放射性疼痛，引起神经功能、运动功能障碍，特定身体部位出现麻痹或瘫痪症状。良好的腰椎间盘突出动物模型的建立,可以生动直观的帮助医疗工作者理解腰椎间盘突出压迫神经后，神经的病理生理变化以及疾病的发***展规律,并可以通过成熟的动物模型,探索有效的***方法。近年来，随着对腰椎间盘突出症的认识研究的不断深化，人们希望通过建立一种可靠、有效的腰椎间盘突出的动物模型，通过施加干预因素，更加准确地观察模型体内产生的变化，探究人体内疾病发生机理，并将研究成果推广到临床，为***腰椎间盘突出症提供合理、有效的防治手段。因此。南京裸鼠疾病动物模型建模

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