提取试剂盒分类

外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，形态也呈现出多样性。microRNA(miRNA)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70—90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。microRNA通过和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻译，从而在转录后水平调控蛋白表达。microRNA在物种进化中相当保守，在动物、植物等中发现的microRNA表达均有严格的组织特异性和时序性。microRNA在细胞生长和发育过程中起多种作用，包括调控发育、分化、凋亡和增殖等。外泌体就像是生物界的邮差，可以在细胞间运输和转移生物活性分子，是细胞间通讯交流的载体。提取试剂盒分类

虽然外泌体在疾病的诊断上有天然优势，但在临床应用上仍有一些限制：外泌体的提取方法金标准仍然是差速离心法，但这种方法费时费力且提取效率较低，难以进行临床推广和应用；而商业化的试剂盒质量参差不齐，往往导致提取物杂质过多，且其售价较高。外泌体的定量是采用颗粒浓度定量，蛋白浓度定量，亦或是核酸浓度定量，目前仍存有争议。由于传统的内参并不适用于外泌体，在实时荧光定量PCR检测靶分子含量时内参的选择尚没有统一的标准。外泌体分子标志物的研究还处于初级阶段。目前外泌体研究的整个流程中成本都很高。外泌体脂质组学有报导指出，外泌体内miRNA参与促进血管新生、抗症性和促进胶原蛋白沉淀等一系列过程。

研究采用蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀，极大地降低了外泌体的提取成本，且获得的外泌体不仅表达外泌体公认的标志蛋白分子，同时也表达胎盘特异性蛋白分子，证明通过这种方法获得的外泌体是胎盘来源外泌体。通过蔗糖密度梯度离心后得到的外泌体沉淀经蛋白质SDS-PAGE胶电泳，银染后可见各蛋白分子条带清晰可见，动态光散射分析粒径，结果显示获得的外泌体颗粒粒径大部分分布于28-91nm之间，与文献报道外泌体颗粒大小相一致。胎盘外泌体经过PKH67荧光染料染色后，与细胞共孵育，荧光显微镜下观察外泌体具备进入细胞的活性，进一步验证了我们应用此种改良的分离方法可有效的获得胎盘来源的外泌体。本研究通过蔗糖密度梯度离心联合2次PEG6000沉淀成功分离得到母体血清中胎盘来源外泌体，并从蛋白标志分子、电镜、粒径及分布、进入细胞活性四方面对其进行了鉴定，为研究妊娠期间胎盘外泌体在正常妊娠及胎盘源性并发症中的作用奠定了基础。

获得囊泡粒径分布的两种方法动态光散射(DLS)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)都被广fan应用于外泌体颗粒数目和粒径分布的测量，但两种方法也各有不足。动态光散射法中散射光强度依赖于颗粒质量(体积)，混合体系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)将严重影响测量结果，因此动态光散射法更适用于单分散体系。而且动态光散射法所得的结果强烈依赖于所应用的数学算法。而采用纳米颗粒跟踪分析仪对不同粒径范围的囊泡进行检测时，为了得到准确的浓度和粒径信息，需要根据所要测量的颗粒粒径范围对仪器分别校准，操作繁琐。受检测灵敏度所限，纳米颗粒跟踪分析仪适用于粒径范围50nm～1μm的颗粒，粒径小于50nm的外泌体无法检测。除此之外，两种方法都依赖光散射和粒子的布朗运动进行分析，难以区分合成的纳米材料、大蛋白质聚合体和生物囊泡。干细胞外泌体有减少细胞凋亡、促进血管生成、抑制纤维化等重要生物学功能，在调控组织再生方面有好的前景。

外泌体的提取方法：超速离心法，这是外泌体提取比较常用的方法。超速离心法得到的外泌的体量比较多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡而不是外泌体。过滤离心法，这种操作简单、省时，不会影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期的准备工作繁杂，比较耗时，量少。PS亲和法提取的外泌体，其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上。外泌体脂质组学

外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质。提取试剂盒分类

唾液中包含来自于唾液腺上皮体外细胞的外泌体，Michael等从唾液中提取外泌体，并对唾液外泌体中的miRNA进行分析，发现此类miRNA有望作为成为唾液腺疾病的生物标志物。Wu等成功从汗液中提取得到外泌体，并进行蛋白质组学分析，在汗液外泌体中鉴定到1062种蛋白质，其中包含多种抗jun肽和免疫因子，表明汗液外泌体参与皮肤免疫。Liu等从患有阿尔兹海默症患小鼠的脑脊髓液中提取得到外泌体，并与野生型小鼠进行对比，发现实验组miR-193b明显下调。提取试剂盒分类