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温州细胞培养支原体检测时间

关键词：温州细胞培养支原体检测时间支原体

2024.06.29

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一步法支原体检测试剂盒的防污染版本通常采用等温扩增技术，如LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）原理，通过支原体特异性引物在恒温条件下对样本进行检测，终通过颜色变化确定样品中是否含有支原体污染。这种方法的优势在于：

1. 快速检测：可以在较短的时间内完成检测，通常在60分钟以内。

2. 高灵敏度和特异性：等温扩增技术可以检测到非常低浓度的支原体DNA。

3. 操作简便：不需要复杂的设备，如PCR仪或电泳设备，只需水浴锅即可完成扩增反应。

4. 减少污染风险：由于无需开盖电泳，可以减少因气溶胶造成的交叉污染。

此外，试剂盒还包含UNG（Uracil-N-Glycosylase）酶，用于防止PCR过程中的污染，UNG酶可以消化反应液中可能存在的尿嘧啶，从而减少因污染导致的假阳性结果。

支原体检测方法qPCR法的应用。温州细胞培养支原体检测时间

细胞培养过程中如果发现支原体污染，可以采取以下一些方法尝试去除污染：

1. 抗*素治*：使用针对支原体有效的抗*素，如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果，可以加入高浓度抗*素进行冲击治*，例如庆大霉素 200ug/ml，四环素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并维持24-48小时后再换入常规培养液。

2. 加温处理：支原体不耐热，可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意，高温也可能对细胞造成伤害，因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。

3. 使用支原体清除剂：市场上有专门的支原体清除剂，按照产品说明使用。

4. 使用支原体清*培养基：如Procell支原体清*培养基，这类产品含有清*支原体的特殊成分，可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。

5. 物理方法：一些实验室采用过滤的方法，使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂，以阻止支原体的侵入。

6. 细胞传代：在一些情况下，通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。

温州细胞培养支原体检测时间支原体检测的样本用什么合适？

qPCR法，即定量聚合酶链式反应（QuantitativePolymeraseChainReaction）法，在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面：

1. 快速定性检测：qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。

2. 临床样本检测：qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体，具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。

3. 监管要求：基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发，其性能满足或超出监管要求，如10CFU/mL。

4. 药物质量控制：qPCR法提供早期检测支原体污染的方法，适用于药物质量控制，具有快速、高度特异性、灵敏性，并符合国际准则。

细胞培养中建议使用支原体检测的原因主要有以下几点：

1. 支原体污染率高：常规细胞培养中支原体污染率保守估计在15-35%之间。

2. 影响实验结果：支原体污染会严重干扰实验结果的可信度，影响培养细胞的形态和生理特征。

3. 难以用光学显微镜检测：支原体是极小的细菌，其细胞膜周围没有细胞壁，无法用光学显微镜检测到。

4. 难以消灭：支原体能够迅速渗透整个实验室，一旦污染很难彻底消灭。

5. 影响产品质量：支原体污染会影响细胞培养产物的质量，监管机构推荐检测所有细胞培养产物中是否存在支原体。

6. 保证实验准确性：定期进行支原体检测和去除，确保无支原体存在细胞培养体系内，才能获得准确的实验结果。

细胞培养过程中支原体污染怎么预防？

支原体污染是细胞培养中普遍的问题之一，细胞库中或正在使用的细胞中，支原体的污染率约为15%-35%。并对培养细胞的生理和代谢造成诸多影响：

01/ 争夺营养：支原体的污染会阻碍细胞生长和增殖

02/ 改变蛋白质、RNA 或 DNA 合成的水平

03/ 改变基因表达、细胞信号传导和形态

04/ 损害膜和细胞器

05/ 导致突变和染色体变化

06/ 时间、金钱和有价值的细胞丢失：支原体的污染会导致严重的经济损失以及研究时间损失

07/ 实验结果的不可靠性

08/ 生物安全问题

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支原体污染一旦发生，不仅对细胞培养造成严重影响，甚至可能导致实验结果失真。而且支原体污染在细胞培养实验中相当常见。因此，预防措施是确保细胞培养环境和实验结果可靠性的重要手段。

01/ 良好的无菌技术及实验操作，保证操作不会引入新的污染

02/ 保持实验空间的清洁

03/ 确保从可靠的来源获取细胞，减少不同细胞之间的交叉传染

04/ 防止交叉污染

05/ 减少气溶胶生成

06/ 谨慎使用抗*素

07/ 定期支原体筛查

08/ 丢弃或处理受到支原体污染的细胞

09/ 保持良好的记录

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