单分子阵列数字ELISA检测

创新性的解决方案：芯弃疾JX-8B数字ELISA

我公司推出的数字化高灵敏ELISA芯片检测产品应用场景：适合生物实验室、医学实验室、科研市场、产品预研、产品开发、ELISA检测、动物病情检测等各种应用场景应用范围：各种高灵敏多重免疫检测，可替代各种ELISA试剂盒，及其他免疫检测产品。

用DNA捕获探针(5‘-NH2/C12-GTTGTCAAGATGCTA）功能化的微球CCGTTCAGAG-3‘)是按照制造商的说明制备的。这些珠子与生物素化互补DNA的1μM（5’-生物素-CTCT）孵育。在含有0.5MNaCl和0.01%Tween-20的TE缓冲液中过夜(16h）孵育GAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘。孵育后，用PBS洗涤珠子三次含0.1%Tween-20的缓冲液。将珠子样品分装至微孔板中100μL中每孔给予400,000个微球。从微孔板孔中吸取缓冲液，将微球重悬后与不同浓度的ofSβG孵育。 芯弃疾JX-8B数字ELISA, 极速检测，快15min能完成 的ELISA检测！单分子阵列数字ELISA检测

芯弃疾JX-8B数字ELISA产品

每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

从TNF-α数字ELISA测定的检测限为~150aM（2.5fg/mL），相当于全血中的~600aM（10fg/mL）；市场上可用的ELISA对TNF-α的比较高灵敏度在血清中的LOD为21fM(0.34pg/mL）（补充图3）。两种方法的目标蛋白零浓度尖峰均为为这些实验提供有用的阴性对照：25%的血清含有多种蛋白质的微摩尔浓度，在这些高蛋白质背景之上可以检测到非常低浓度的目标蛋白。我们还开发了一个证明用于显示低浓度核酸可以检测到的DNA的主要数字分析方法，而无需复制目标

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    芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测我们的方法利用了亚飞克尔反应室阵列（图1C）我们称之为单分子阵列（SiMoA）——可以分离和检测单个酶分子20-24。这种方法借鉴了Walt等人20-23的工作阵列用于研究单个酶的动力学和抑制作用。我们的目标是利用捕获和检测单个酶的能力来检测用酶标记的单个蛋白质分子。在这个单分子免疫测定的第一步（图1A)，在微球（直径μm）上形成一个三明治抗体复合物，结合的复合物用酶标记，如同常规的基于微球的ELISA。当测定含有极低浓度蛋白质的样品，蛋白质的比值分子（以及由此产生的酶标记复合物）与微球的比例很小（通常小于1：1)，因此含有标记免疫复合物的微球百分比遵循泊松分布，导致单个微球上存在单一免疫复合物。例如，如果在(3000个分子）的蛋白质中捕获并标记了50μM的蛋白质，并且在200，000个微球上进行标记，则珠子，然后，。无法检测到这些低数量的酶使用标准检测技术（例如，平板阅读器）的标签，因为荧光染料由每种酶生成的产物扩散到一个大卵试验体积（通常为)，并进入其中需要数十万种酶标签才能产生高于该水平的荧光信号背景。

芯弃疾JX-8B数字ELISA产品是什么？怎么做到单分子技术的低成本实现？参考原理：

分子水平的疾病检测正在推动早期诊断和治病的新兴变革。该领域面临的一个挑战是，用于早期诊断的蛋白质生物标志物可能存在于非常低的丰度中。传统免疫分析技术的检测下限为飞摩尔范围（10−13M）。数字免疫分析技术将检测灵敏度提高了三个数量级，达到了飞摩尔范围（10−16M）。这一能力有可能在诊断和治病领域开辟新的进展，但这些技术已被限制为不适合高效常规使用的手动程序。我们描述了一种新的实验室仪器，该仪器能够完全自动化单分子阵列（Simoa）技术进行数字免疫分析。该仪器具有单分子灵敏度和多重检测，具有快速周转时间和每小时处理66个样本的能力。针对心血管、肿标、传染病、神经学和炎症研究中的16种感兴趣的蛋白质，开发了单分子和多重数字免疫分析方法。与传统方法相比，Simoa免疫分析方法的平均灵敏度提高了lELISAwas>1200倍，变异系数为<10%。数字免疫分析在推进人类诊断方面具有潜力，这在两个临床领域得到了体现：创伤性脑损伤和传染病的早期检测 芯弃疾JX-8B简易版单分子ELISA检测产品，极速检测，检测用时只需要 15-30min！

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单分子的检测原理：由Simoa数字免疫分析法实现的超灵敏度已在先前讨论过。简而言之，类似免疫分析中的酶-底物反应是在相对较大的反应体积（50-100µL）中进行的，在信号生成步骤中稀释了产物分子。信号分子的扩散和稀释将灵敏度限制在皮摩尔范围内。相比之下，Simoa通过将单独标记的免疫复合物和底物限制在飞升大小的孔中，从而限制了荧光产物分子从酶-底物反应中的扩散。当单一酶标签催化底物转化为荧光产物时，产生的荧光团被限制在孔中，从而在短时间内产生可测量的荧光信号。单分子POCT产品-数字化ELISA芯片，帮您数字化高灵敏检测，且微量样本多重指标检测；高灵敏的数字ELISA多重检测

芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品，多重检测，同时测试2-6个检测项目；单分子阵列数字ELISA检测

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每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

动力学上，对于200,000个微球分散在100μL中，珠子之间的平均距离约为80μm。大小为TNF-α和PSA（分别为17.3和30kDa）的蛋白质将在不到1min的时间内扩散80μm。表明，在2小时的孵育过程中，蛋白质分子的捕获不会受到限制动力学上。其次，必须有足够的珠子被加载到阵列上以限制泊松噪声。200,000个珠子加载到50,000孔阵列中，通常会导致20,000–30,000个微球被困在1mL孔中。对于典型的背景信号为1%活性微球（见下文），这种装载导致背景信号为200-300个活性微球检测到，对应于泊松噪声的可接受变异系数（CV）为6-7%。第三，过高的微球浓度可能导致：a）非特异性结合增加，降低信噪比；以及b）分析物与微球的比例过低，导致活性微球的比例过低，从而导致泊松噪声引起的高CV。这些因素的平衡NatBiotechnol.作者手稿；可在PMC2010年12月1日获得。Rissin等人第5页因素意味着每100μLoftest样品含有20万到100万颗珠子是比较好的数字ELISA。同时，为了获得可接受的背景信号（1%）和泊松噪声）。 单分子阵列数字ELISA检测