江苏高脂高糖动物模型实验室

的比较研究，可以充分认识同一病原体(或病因)对不同机体带来的各种损害。因此从某种意义上说，可以使研究工作升毕到立体的水平来揭示某种疾病的本质，从而更有利于解释在人体上所发生的一切病理变化。动物疾病模型的另一个富有成效的用途，在于能够细致地观察环境或遗传因素对疾病发展的影响，这在临床上是办不到的，对于地认识疾病本质有重要意义。因此利用动物疾病模型来研究人类疾病，可以克服平时一些不易见到，而且不便于在病人身上进行实验的各种人类疾病的研究。同时还可克服人类疾病发展缓慢，潜伏期长，发病原因多样，经常伴有各种其它疾病等因素的干扰，可以用单一的病因，通过阿霉素（Adriamycin，ADR）腹腔注射给药（Adriamycin，ADR）试图造成小鼠心衰。江苏高脂高糖动物模型实验室

不同的诱导剂对应不同的临床适应症，我们可以根据实验需要、技术能力选择相应的模型，DSS诱导的模型适应与炎症性肠炎的大多数适应症，且此模型操作简单，因此在临床前和临床研究中较为常用，但是此模型的成模率、模型稳定性差。注意事项1、试剂购买时尤为需要注意的是DSS，购买时需购买Da在36000-50000范围内的，国产试剂或者进口试剂均可。2、软管购买时尽可能选用软管，胆汁插管的管子粗细合适，硬管较为容易直肠，软管较为费力。西藏皮下成瘤动物模型造模避免了在人身上进行实验所带来的风险。

扩增产物为。其中a2,3,6,9,10,b1为阳性。扩增3’端长臂使用引物：neof:5’-cgccttcttgacgagttcttctga-3’；gm3’lrr:5’-ggtgcttgagtagtgttgaatctcagtggacca-3’结果见图3中b，扩增产物为。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g为阳性杂合子，+/+为野生型对照。5将步骤4得到的杂合子小鼠动物与转基因鼠flper鼠交配繁育，得到gm20541基因条件性敲除杂合子小鼠；6将步骤5得到的gm20541基因条件性敲除杂合子小鼠相互交配繁育，得到gm20541基因条件性敲除纯合子小鼠；7将步骤6得到的gm20541基因条件性敲除纯合子动物与转six3-cre基因动物交配，得到视网膜前体细胞gm20541基因敲除小鼠。转基因鼠flper鼠购自美国捷克森实验室(品系名称：(rosa)26sortm1(flp1)dym/rainj)。six3-cre转基因小鼠(mgi：3574771)由美国德克萨斯大学安德森中心赠送。six3是一个前脑腹侧和视网膜前体细胞的标志性转录因子，其特异性驱动cre基因在视网膜前体细胞表达，cre蛋白可以进入细胞核，识别基因组上loxp位点，实现基因敲除。基因敲除小鼠鉴定步骤：对上述视网膜前体细胞敲除gm20541基因的小鼠的基因型鉴定，操作如下：(1)剪小鼠尾梢少许组织样本，置于干净的；(2)在离心管中加入100μl裂解液。

转基因动物模型由于转基因动物发病原因确定，病理症状已知，有利于AD机制研究和防治药物的筛选，是AD研究中使用的动物模型。一般以与AD发病有关的APP、早老素（PS）和tau等基因突变为主的单转基因、双转基因和多转基因动物模型为主要研究对象。AD转基因小鼠的构建。Tg小鼠是通过获取单细胞胚胎并将修饰或构建的相关基因插入胚胎的雄性细胞核而产生的。然后将胚胎植入一只假孕小鼠体内，由此产生的后代携带感兴趣的突变蛋白，从而建立了一个正在研究的疾病模型。转基因小鼠可以培育出一种作为人类疾病模型的小鼠。卵巢早衰（POF）是多种病因所致的卵巢功能衰竭。

实验样本分类实验一般采取样本有：血液样本、组织样本和细胞样本。通常，组织样本采集后，应立即用等渗溶液（PBS或生理盐水）尽量把血液漂洗干净（除非血液也是分析对象），用滤纸或纱布吸干，把样本分切成几分，每份的体积约2个黄豆大小，每份用一个管子装。血液样本的采集应根据不同实验的要求，将会采取不同策略。血清样本：全血中不加抗凝剂，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黄色透明液体。（全血标本室温放置2小时3000rpm/min离心15min）血浆样本：全血中加抗凝剂，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黄色透明液体。（可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃，3000rpm/min离心15min）如果是做生化\ELISA等检测可以考虑血浆和血清，根据获得的样本量可考虑分装成100-500μl/管，可避免反复冻融造成的检测误差。生化：建议优先选择血清，其次选择肝素抗凝血浆；ELISA：建议优先选择血清，其次选择肝素或EDTA抗凝血浆；凝血实验：只能选择枸橼酸钠抗凝血浆；血常规：只能选择EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白细胞、血小板等建议用抗凝全血。如果要做流式建议用专门的流式用血液收集管，防止表面抗原的丢失，或者尽快安排就近检测。样本处理取样完后。橄榄油联合酒精致肝硬化门脉高压大鼠模型。上海豚鼠动物模型建模

可以简化实验操作和样品收集。江苏高脂高糖动物模型实验室

转基因小鼠对黑色素瘤发生的分子途径的理解有重要意义。此外，转基因小鼠是可靠且可重现的模型，用来评估受损基因对黑色素瘤生物学的影响。应用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因组改变在黑色素瘤的发生和发展的重要性及药物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一种富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，为胶原原纤维形成的关键调节剂。黑色素瘤中Lumican表达降低与浸润相关。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物导入胚胎干细胞，建立Lum－/－转基因小鼠。该模型可提供与发生和转移相关机制及可见变的进展，以及确定负责的黑色素瘤进展的基因。2Tyr::N-RasQ61K转基因小鼠方法：有研究者使用突变的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K构建体，并注射到卵母细胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K转基因小鼠。3BrafV600E转基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重组酶技术从内源性Braf基因中诱导BrafV600E表达，建立BrafV600E转基因黑色素瘤小鼠模型。总结目前已有三种不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于实验动物与人类基因组、基因调控、细胞类型、结构与组成等方面是有一定差别。江苏高脂高糖动物模型实验室