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上海anti Flag免疫沉淀磁珠的选择

关键词：上海anti Flag免疫沉淀磁珠的选择免疫沉淀

2024.07.02

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Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的实验方法通常包括以下步骤：

1. 细胞培养与裂解：细胞在适宜的培养条件下生长到适当的密度。

蛋白质分离：裂解后的细胞混合物通过离心去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞。收集上清液

2. 抗体的添加：将特异性抗体（针对目标蛋白质的抗体）加入到裂解物中。

3. 免疫复合物的形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。

4. 亲和介质的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）。

5. 免疫复合物的捕获：将混合物与珠子孵育一段时间后，使用磁铁或离心的方法将珠子收集起来，同时捕获了与之结合的免疫复合物。

6. 洗涤：洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和其他分子。

7. 洗脱：使用适当的缓冲液将免疫复合物从珠子上洗脱下来，常用的缓冲液包括SDS样品缓冲液，用于后续的电泳分析。

8. 蛋白质分析：洗脱的蛋白质可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot、质谱分析等方法进行进一步分析。

9. 实验对照：实验中应包括阳性对照和阴性对照，以确保实验结果的可靠性。

10. 数据分析：对实验结果进行分析，确认目标蛋白是否成功沉淀，并鉴定任何可能的相互作用蛋白。

免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠？上海anti Flag免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验方法通常包括以下步骤：

1. 样本准备

2. 蛋白质浓度测定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。

3. 抗体预处理：如果使用预固定的抗体，需先将抗体固定在固相支持物上，如琼脂糖珠或磁性微珠。

4. 免疫沉淀反应：将裂解液与特异性抗体（固定或未固定）混合，并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜，以允许抗体与目标蛋白质充分结合。

5. 固相支持物的回收：对于未固定的抗体，加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。

6. 洗涤：去除未结合的蛋白质和杂质，通常需要多次洗涤固相支持物。

7. 洗脱：使用适当的洗脱缓冲液（如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液）从固相支持物上洗脱免疫复合物。

8. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等，以进一步分析目标蛋白质。

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免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。

基本原理

免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质（抗原）之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体，可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。

免疫沉淀技术有多种类型，包括：

1. 个别免疫沉淀法（Individual IP）

2. 免疫共沉淀法（Co-IP）

3. 染色质免疫沉淀法（ChIP）

4. RNA免疫沉淀法（RIP）

近年来，免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。

免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。免疫沉淀是一种生物学技术，它利用抗体的特异性结合特性来富集和分离混合物中的特定蛋白质。这种技术是研究蛋白质表达、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质修饰和蛋白质功能的强大工具。免疫沉淀技术IP实验步骤。