河南疫苗产品支原体检测国产替代

支原体检测 NAT 方法验证需满足全球药典对检测限、专属性、耐用性、可比性等关键指标的要求，且 EP、USP 新草案提出更严格标准。检测限（LOD）方面，EP 要求针对每种支原体确定临界值，需 3 次单独 10 倍梯度稀释、共 24 个检测数据，95% 检出浓度达标；USP 要求标准菌株浓度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次检测数据支持统计分析；ChP 未明确支原体专属要求，但需满足 “微生物检出下限数量” 设定标准。专属性上，EP 建议测试革兰氏阳性菌交叉污染，USP 要求生信分析与实际样品验证结合，ChP 强调外来成分不干扰试验。耐用性方面，EP 需验证试剂浓度、提取与反应程序变化，USP 涵盖设备、反应体系等参数波动。可比性上，EP 要求 NAT 法与药典法 LOD 及特异性对比，替代培养法需达 10 CFU/mL，替代指示细胞法需达 100 CFU/mL，USP 则视样品基质情况要求可比性研究。

支原体 NAT 检测中异常曲线的出现多与操作设置、耗材使用或实验环境相关，需针对性排查解决。首先需确认软件设置正确性，对照试剂盒说明书检查时间、温度、循环数、荧光采集等参数，尤其需注意关闭不含 ROX 试剂的参比荧光功能。其次若扩增曲线无抬升却出现 CT 值，需调整基线范围，将起点设为荧光信号稳定的循环数，终点设为扩增曲线起峰前一个循环数。再者需确保耗材与仪器匹配，避免使用普通 PCR 耗材或与加热模块规格不符的反应管，防止荧光传导不佳或热传导不充分。此外，曲线先上升后下降可能是反应液蒸发导致，上机前需检查八连管管盖无缝隙，避免液面下降干扰结果。

外源因子全自动核酸检测分析系统系统在数据追溯与合规管理方面进行了针对性设计，完美适配生物药行业的严格监管要求。系统内置三级权限管理机制，可对操作人员、检测项目、数据访问进行准确管控，同时具备完善的日志审计追踪功能，详细记录检测全流程的关键信息，确保数据可追溯、可核查，完全符合 21CFR Part11 法规要求。数据传输方面，系统支持与 LIMS 实验室信息管理系统无缝对接，实现检测数据的自动同步与集中管理，同时配备 USB 接口，可直接连接打印机打印实验结果，满足企业纸质记录存档需求。这些功能让支原体检测的每一个环节都处于合规管控之下，为企业应对监管检查、保障数据真实性提供了有力支持。

AdvSHENTEK 一体化支原体检测试剂盒具备较广的检测覆盖范围与极强的专属性，能应对各类潜在污染风险。试剂盒可准确检出近 200 种微生物，包括支原体、螺原体、无胆甾原体、虫原体及中间原体，覆盖生物药生产中常见的污染菌株类型。经严格验证，对鸡滑支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、肺炎支原体等多种菌株，在 10CFU/mL 和 100CFU/mL 浓度下的阳性检出率均达到 24/24，其中包含多个 ATCC 标准菌株。同时，试剂盒专属性强，无交叉干扰现象，能有效区分目标菌株与其他非目标微生物，避免假阳性结果，确保检测数据的准确性，为企业排查支原体污染提供可靠保障。

湖州申科生物构建了完整的支原体检测解决方案，包含支原体 DNA 提取纯化试剂盒与检测试剂盒两大产品。提取纯化试剂盒采用磁珠法技术，具有回收率高、样品兼容性强的优势，配合湖州申科 rHCDpurify^®前处理系统可实现自动化提取操作，大幅提升检测效率并减少人为误差。检测试剂盒采用 PCR - 荧光探针法，覆盖近200种支原体 DNA 序列，检测专一性强，且对不同品牌 PCR 仪器具有良好的适用性，性能稳定可靠。产品规格明确，提取试剂盒可处理 50 个样品，检测试剂盒可完成 50 次反应，整套体系从样品前处理到定性检测形成闭环，满足生物制品生产各环节的支原体筛查需求。

培养基的科学选择与合规使用是支原体培养法检测成功的基础，湖州申科按 USP 标准明确了三类推荐培养基的适用场景。Hayflick Media 用于支原体一般性检测，Frey Media 专门针对滑液囊支原体检测，Friis Media 则适用于非禽类支原体检测。为确保少量支原体（约 100cfu 或 100ccu）不被遗漏，需使用足够数量的固体与液体培养基开展检测；若选用其他替代培养基，必须严格符合 USP 标准要求。此外，每批培养基均需进行针对性的微生物检测（即营养特性测试），通过标准化的质量把控，避免因培养基性能缺陷导致检测失效，为后续检测流程提供稳定可靠的基础条件。